Калицивирус кошек. Диагностика в лаборатории

Возбудитель и его особенности.

Коронавирус — плеоморфный РНК-вирус, имеющий характерную оболочку в виде кольца или короны, с большими лепестками в форме выступов (пепломеры или спайки). С помощью этих пепломеров вирус прикрепляется к клеткам. Диаметр вируса около 100 нм. Коронавирус у кошек принято подразделять на две группы по степени патогенности (поражающей активности) штаммов.

• Высокопатогенные штаммы – вирус инфекционного перитонита кошек (ВИПК).
• Штаммы, вызывающие легкие энтериты или вообще безопасные для здоровья – кишечные коронавирусы кошек (ККВК).

Обе группы штаммов считаются единой популяцией вирусов, но с различной степенью патогенности. Однако, было установлено, что вирус инфекционного перитонита является мутацией кишечного коронавируса кошек, которая происходит спонтанно в организме кошек во время течения болезни, при стрессовых ситуациях. Среди всех коронавирусов (поражающих других животных и человека) вирус инфекционного перитонита кошек уникален тем, что поражает клетки иммунной системы кошек. Вирус инфекционного перитонита не стойкий и не выдерживает действия высоких температур и большинства общепринятых средств дезинфекции (в том числе хозяйственного мыла). Однако на сухих поверхностях вирус может сохраняться в опасном состоянии 2-3 дня при благоприятных условиях. Так же вирус довольно устойчив к низким температурам, низкому уровню рН и к фенолам.

Калицивирус кошек. Диагностика в лаборатории

Калицивирус кошек является высоко контагиозным патогеном, широко распространенным в кошачьих популяциях. Кошки заражаются калицивирусом через слизистые ротовой полости, носа и конъюнктивы. Лимфоидная ткань ротоглотки является первичным местом размножения вируса. После заражения через 3-4 дня наблюдается проходящая виремия, и после этого вирус может обнаруживаться в других тканях организма. Калицивирус вызывает некроз клеток эпителия; везикулы, обычно образующиеся по краю языка, преобразуются в язвы. Заживление таких язв может занять 2-3 недели.
Клинические симптомы могут различаться в зависимости от штамма калицивируса, возраста зараженной кошки, а также множества факторов. В некоторых случаях инфекция субклиническая, во многих других наблюдается типичный синдром, сопровождающийся изъязвлением языка и сравнительно легким острым респираторным заболеванием. В основном, такие симптомы наблюдаются у котят. Инкубационный период составляет от 2 до 10 дней.

Основными симптомами являются язвы в ротовой полости, чихание и серозные истечения из носа. Также отмечают лихорадку. Иногда анорексия сопровождается гиперсаливацией из-за язв в ротовой полости, локализующихся, в основном, на языке и гораздо более выраженных чем признаки ринита. В некоторых тяжелых случаях могут развиваться пневмония, проявляющаяся как одышка, кашель, лихорадка и подавленное состояние, особенно у котят. Этот вирус реже поражает другие ткани, такое заражение может привести к развитию пневмонии (очаговому альвеолиту, прогрессирующему до острой экссудативной пневмонии, а затем до пролиферативной интерстициальной пневмонии) и хромоты (острому синовииту, сопровождающемуся утолщением синовиальной мембраны и увеличению объема синовиальной жидкости). При этом вирусный антиген был идентифицирован в макрофагах синовиальной мембраны суставов.

Патогенез вирулентного системного заболевания, вызываемого кошачьим калицивирусом (VS-FCV) очень сильно отличается от описанной типичной картины. Такие штаммы вызывают обширный васкулит, вовлечение множества органов и смерть двух третей зараженных кошек. Вирус получает доступ к клеткам, которые обычно не поражаются. Поражения очень обширные и включают подкожные отеки, изъязвление ротовой полости, а также изъязвления различной степени тяжести на коже, особенно на ушных раковинах, подушечках лап и ноздрях. Другие поражения включают бронхоинтерстициальную пневмонию, а также некроз печени, селезенки и поджелудочной железы.

После окончания острой стадии заболевания у большинства кошек вирус сохраняется в организме еще в течении 30 дней, некоторые кошки выделяют вирус в окружающую среду гораздо дольше, возможно, что и всю оставшуюся жизнь. У таких клинически здоровых носителей вирус может локализоваться в эпителии миндалин.

Статус носительства калицивируса

Большинство кошек выделяют калицивирус в течение 30 дней после заражения. Носителями считаются такие кошки, которые выделяют вирус дольше. Отдельные животные могут выделять калицивирус всю жизнь, хотя большинство кошек все же спонтанно освобождаются от вируса.

Иммунитет

В первые недели жизни для защиты от вируса очень важны материнские антитела. В условиях эксперимента было показано, что примерное время полужизни материнских антител к калицивирусу составляет 15 дней, а сами антитела циркулируют в крови котят 10-14 недель. Однако в обычных условиях у 20 % котят в возрасте шести недель уже не выявляется антител против широко используемого вакцинного штамма.
У взрослых кошек приблизительно через 7 дней после заражения появляются нейтрализующие вирус антитела. Также показано, что кошки могут быть защищены и в отсутствии детектируемого уровня вирус-нейтрализующих антител, что предполагает наличие других иммунных механизмов. Также калицивирус-специфические IgG и IgA антитела были обнаружены в слюне животных, хотя их значимость при защите организма еще не известна.

Диагностика

В силу того, что существует бессимптомная стадия носительства, и факта, что вирусы из живых вакцин иногда могут выделяться после вакцинации, следует с осторожностью интерпретировать любой положительный результат на наличие калицивируса методом ПЦР при отсутствии корреляции между наличием вируса и клиническими признаками.

Диагностика VS-FCV опирается на клинические признаки, высокую контагиозность и высокий уровень смертности, а также выделение одного и того же штамма из крови нескольких зараженных кошек, что оценивается с помощью установления нуклеотидной последовательности гипервариабельных участков гена капсида вируса.

Для обнаружения РНК калицивируса кошек в конъюнктивальных смывах и смывах ротовой полости, крови, кожных соскобах или ткани легких (в зависимости от клинической картины) применяется ПЦР с обратной транскриптазой.

Диагностическая чувствительность ПЦР зависит от используемой тест-системы и штамма вируса, вызвавшего заболевание, поскольку генетическое разнообразие штаммов калицивируса кошек очень высоко. Поэтому молекулярный анализ следует оптимизировать таким образом, чтобы свести к минимуму процент ложноотрицательных ответов.

Выделение вируса

Выделение вируса является полезным методом для обнаружения калицивируса кошек. Положительный результат свидетельствует о наличии реплицирующегося вируса. Еще одно преимущество этого метода заключается в том, что метод менее чувствителен к эффекту генетического разнообразия штаммов, чем ПЦР. Но такой анализ не является рутинным и в большинстве лабораторий не проводится.

Серология

Антитела к калицивирусу кошек можно обнаружить в процессе нейтрализации вируса или с помощью ИФА. Поскольку распространенность антител в популяции довольно высокая в силу природной встречаемости с вирусом и вакцинации, наличие специфических антител не помогает само по себе поставить диагноз. Уровень антител можно использовать для того, чтобы определить, защищена ли кошка или нет, но иногда могут быть получены ложноотрицательные результаты, если антитела не реагируют перекрестно с лабораторными штаммами, используемыми при тестировании. Также титры могут быть выше, когда образуются гомологичные, а не гетерологичные пары вирус-антитело.

Независимая Ветеринарная Лаборатория «Поиск» рада предложить вам следующие тесты для диагностики калицивируса:

1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с обратной транскриптазой. С помощью этого метода в образцах выявляется наличие РНК калицивируса кошек. Тест-система в нашей лаборатории позволяет обнаружить около 17 различных штаммов калицивируса. Показаниями к проведению теста является клиническая картина, соответствующая заболеванию. Не следует проводить этот тест в течении полутора месяцев после вакцинации и просто так у животных без каких-либо симптомов. Исключение составляют животные, у которых необходимо выявить статус носительства при введении в питомник. Материалом для исследования служат конъюнктивальные и назальные смывы, соскобы язв из ротовой полости, кожные соскобы и кровь (ИСКЛЮЧИТЕЛЬНО при подозрении на VS-FCV).

2. Проверка напряженности иммунитета с помощью бесприборных тестов VacciCheck®. Этот набор разработан для определения сывороточного титра IgG к вирусу панлейкопении (FPLV), вирусу герпеса (FHV) и калицивирусу (FCV). Основной задачей этого набора является оценка статуса иммунизации животного в отношении этих трех патогенов. Тест можно применять для кошек в разных ситуациях, учитывая особенности интерпретации результатов в каждом конкретном случае. Материалом для исследования служит сыворотка крови или цельная кровь.

Пути заражения

Источником заражения являются больные особи, которые выделяют вирус с каловыми массами, мочой или носовыми истечениями. Основным способом передачи является прямой контакт между кошек, через контакт кошки с экскрементами заболевшего животного, через корм (алиментарно), не исключается воздушно-капельный путь передачи вируса. Наиболее вероятно заражение при длительном контакте больного животного со здоровыми сородичами. Поэтому вспышки заболевания чаще всего наблюдаются в питомниках.

Что такое перитонит и почему он развивается у кошек

Кошачий вирусный перитонит является следствием мутировавшего в теле животного короновируса. Механизм развития заболевания неизвестен, предположительно причиной его возникновения являются:

• стресс (спровоцировать заболевание способен переезд на новое место или появление в доме еще одного питомца);
• неправильная работа иммунной системы, нарушение ее функций вследствие истощения больного животного;
• возраст и связанные с ним физические и психические отклонения.

Больная перитонитом кошка

Коронавирус содержит РНК — если рассматривать его под микроскопом, то можно увидеть крупную шаровидной формы сферу, от которой отходят булавовидные отростки, напоминающие своей формой корону. Идеальным местом для размножения вируса становятся щитовидная железа, кишечник и почки животных.

Пути передачи

Вирус передается оральным или воздушно-капельным путем.

Чаще всего кошка заражается:

• при непосредственном контакте с другим животным на протяжении длительного периода времени (использование общего лотка, миски для еды и воды, облизывание друг друга);
• при контакте с мочой и экскрементами зараженного животного;
• при рождении (больное животное заражает потомство — котенка).

Важно! Понять, чем именно больно животное, когда заразилось и успело ли передать вирус дальше, непросто, поскольку у кошачьего перитонита нет явно выраженных симптомов.

Симптомы инфекционного перитонита.

Клиническая картина инфекционного перитонита у кошек отличается разнообразием и наличием нескольких клинических синдромов коронавирусной инфекции кошек. Различают два вида клинических проявлений инфекционного перитонита; выпотной ( влажный ) и сухой перитонит. Начальные симптомы инфекционного перитонита кошек в обоих случаях, как правило, являются неспецифическими и неярко выраженными. Температура тела может подниматься до 39,5, животное становится менее активным, несколько заторможенным, возможны отказ от пищи и редкая рвота. Иногда на начальной стадии болезни могут отмечаться респираторные симптомы или диарея.

Выпотной перитонит характерен следующими признаками:

1. Асциты или выпоты в плевральную полость
2. Активность и сохраненный аппетит, либо вялость и анорексия
3. В некоторых случаях легкая лихорадка; имеет склонность к колебаниям
4. Нарушения дыхания (при выпоте в грудной клетке)
5. Потеря веса
6. Увеличенные мезентериальные лимфатические узлы и печень
7. Распространение патологического процесса с вовлечением других органов брюшной полости (это приводит к появлению гепатопатии, почечной недостаточности, заболеваний

На поздних стадиях болезни часто наблюдается желтуха, болезнь быстро завершается летальным исходом.

Сухой перитонит характерен вялым течением и слабо выраженными клиническими признаками. К наиболее характерным признакам относятся:

1. Потеря веса
2. Отсутствие аппетита
3. Поражение глаз — увеиты, отложения на роговице, помутнение стекловидного тела и т.д.
4. Поражение центральной нервной системы
5. Утолщение стенки кишечника
6. Увеличение лимфатических узлов
7. Поражение печени
8. Поражение почек

Механизм развития болезни

Коронавирус внедряется через ворсинки эпителиальных клеток, выстилающих ротовую или носовую полость, носоглотку. Далее патогенез может развиться по двум вариантам: либо сухая форма с первоначальными симптомами пищеварительных расстройств, либо влажная форма, у которой нет специфических признаков на первом этапе.

При сухой форме инфекционного перитонита кошек вирус может очень долго оставаться в организме и никак себя не проявлять. Но при определенных обстоятельствах происходит усиление его вирулентности (своеобразный естественный пассаж штамма) и патогенность резко усиливается.

Важно! Вирус может очень долго «дремать» в теле кошки. Возможно, на это влияет общее состояние организма, его способность противостоять болезнетворным агентам.

При влажной форме инфекционного перитонита кошек процесс развивается гораздо динамичнее, но специфические визуальные признаки появляются только на последних стадиях.

После того как вирус становится максимально патогенным, иммунная система реагирует выбросом макрофагов в кровь – Т-лимфоцитов, а затем и В-лимфоцитов. Это инструменты гуморального иммунитета, которые отвечают за формирование специфического иммунного ответа и неспецифическую защиту.

Чаще всего этих мер бывает достаточно, чтобы перебороть болезнь, но есть ряд патологий, при которых вирусные частицы поражают клетки иммунной системы. Это иммунодефицитные заболевания, к которым также относится перитонит.

В таком случае главной мишенью вируса всегда будет иммунная система и ее «инструменты». Это единственный защитник живого организма, которым его наделила природа.

При вирусной атаке выпущенные макрофаги не полностью выполняют свою функцию – они поглощают агрессивные частицы, но убить их не могут. В итоге, вирус питается запасами пораженного макрофага, разрушает его и выходит наружу невредимым.

Но на этом патогенное действие вируса не заканчивается, он проникает во все органы и ткани. Большое количество агрессивных частиц накапливается в местах, где много мелких капилляров – в печени, селезенке и других органах.

При ослабленном иммунитете под воздействием вируса повышается порозность капилляров (проницаемость сосудистых стенок) и часть жидкой фракции крови выходит за их пределы. Жидкость скапливается в брюшной полости, начинается асцит (водянка) и воспаление брюшины. Так развивается скоротечная влажная форма перитонита.

Если же иммунная система достаточна сильная, она активно сопротивляется и успевает выработать антитела к вирусу. Тогда процесс борьбы затягивается, но в него также вовлекаются все внутренние органы. Это сухая форма FIP.

Диагностика заболевания

Для установления точного диагноза помимо клинического осмотра необходимо провести лабораторные исследования. Лабораторная диагностика чаще всего основана на обнаружении специфических антител или генома вируса в сыворотках крови, асцитной или плевральной жидкостях. Методы, применяемые для лабораторной диагностики разнообразны, но наиболее распространены ПЦР-диагностика (Полимеразная цепная реакция) на обнаружение РНК коронавируса и ИФА- диагностика (Иммуноферментный анализ) на установление титра (количество) антител к коронавирусной инфекции в сыворотке крови. Также используют гистологическое исследование пораженных тканей для постановки окончательного диагноза на инфекционный перитонит. Все эти методы желательно применять в комплексе.

Профилактика

Поскольку инфекционный перитонит заболевание неизлечимое необходимо особое внимание уделять профилактике болезни. В первую очередь нужно стараться не допускать заражения любимца коронавирусной инфекцией. Для этого следует соблюдать правила дезинфекции и личной гигиены при общении с животными, свести к минимуму наличие стрессовых ситуаций. Избегать скученного содержания кошек в одном помещении. Возможна вакцинация здоровых животных.

Особое внимание нужно уделять питомцам, переболевших коронавирусным энтеритом. Такие животные, как правило, остаются носителями коронавирусной инфекции и наиболее подвержены развитию инфекционного перитонита и нуждаются в мерах по повышению иммунного статуса. Так же стоит регулярно сдавать анализы на титр антител, что бы контролировать их уровень и следить за развитием инфекции.

Для эффективной профилактики и повышения иммунитета применяют препарат «Форвет» курсовым методом. Профилактика включает двукратный курс длительностью по 5 дней с интервалом 14 дней в рекомендованных дозах с периодичностью раз в 6 месяцев. Применение «Форвета» позволяет удерживать уровень антител к коронавирусной инфекции на минимальных значениях и минимизирует риск развития инфекционного перитонита у кошек. Также препарат нейтрализует губительное воздействие стрессовых ситуаций.

Чем кормить кошку при перитоните

Больному животному показано диетическое питание, рекомендованное врачом. Кошку кормят специальным кормом, предназначенным для животных, испытывающим проблемы с пищеварительной системой. Питомца можно кормить ячневой кашей, давать небольшое количество вареного яичного белка, поить не сладким чаем.

Сколько живут кошки с перитонитом

Прогноз неблагоприятный, 85-90% кошек с диагнозом «перитонит» погибает даже при условии своевременно начатого лечения.

Если заболевание выявлено спустя несколько месяцев после заражения, то процент смертности увеличивается до 100%.

Животное с влажной формой перитонита живет 3-6 месяцев. Если у питомца выявлена сухая форма заболевания, то кошка может прожить 3-4 и даже 5 лет, именно столько иногда длиться инкубационный период.

Случаев полного выздоровления не наблюдалось.

Пожизненная диагностика

Зараженное животное исследуют постоянно. Мониторинг его состояния позволяет своевременно выявить случаи ухудшения или улучшения ситуации, определиться с методами лечения.

Владельцу кошки придется регулярно возить ее к ветеринару на осмотр и забор жидкостей для анализа. Только так можно продлить короткую жизнь питомца.